融合蛋白表达法有何优点?
融合蛋白即在表达产物的N 端或C端耳有非目的赍白的氮基酸序列。为了表达N 端融合蛋白,一般在表达载体的SD序列之后加上起始密码子.其后为一段原核读码框,接着是克隆位点.外源基因就克隆到该位点,但读码框必须和上游的原核读码框符合,而表达C 端总合蛋向载体在SD序列之后为克隆位点,随后是一段带有终止密码子的原核读码框,避行融合表达的优点主要有:(1)克隆基因的mRNA的高效翻译不仅 依赖于核糖体结合位点的存在,而且,受编码起始的核苷酸序列的影响。这可能是链间配对形成的次级结构可以影响核糖体与其结合位点的结合,如果相关的序列是由E.coli 序列组成,可以避免这一可能性。(2) 在融合蛋白中存在细笛肽可以稳定分子,阻止被寄主细胞中的蛋白酶降解。(3) 细菌片段可能含有信号肽,可以引导重组蛋白运输到胞外而进入培养基或者质膜空间。这样可以简化眼组蛋白从培养物中纯化。(4) 细菌片段可以通过亲和色谱法辅助重组蛋白的提取。
举一反三
内容
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选用融合蛋白的表达策略的最主要优点是( ) A: 容易检测表达蛋白 B: 构建表达载体方便 C: 表达产物较稳定 D: 易获得有天然活力的蛋白
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融合表达的蛋白可通过检测其融合蛋白来间接判断该目的蛋白是否表达。
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大肠杆菌融合表达系统的优点有( )。 A: 表达产物容易标识和跟踪 B: 能够帮助重组蛋白形成正确的而空间结构 C: 表达重组蛋白分子量大 D: 便于分离纯化
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基因融合表达的优点有( )。 A: 帮助目的蛋白形成包涵体 B: 有助于目的蛋白实现可溶性表达 C: 帮助目的蛋白形成正确的空间结构 D: 便于进行亲和层析分离 E: 提高目的蛋白表达的产量 F: 便于辨识和跟踪目的蛋白的表达
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中国大学MOOC: 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是:a.融合基因能稳定扩增;b.融合蛋白能抗蛋白酶的降解;c.表达产物易于亲和层析分离